简明扼要讲一下Southern blotting,PCR,原位杂交

一、简明扼要讲一下Southern blotting,PCR,原位杂交

Southern blotting：印迹（Blotting）通常是指通过吸附或电泳方法将经凝胶电泳分离的大分子物质从胶上转移到固相载体上，再与特定的探针反应从而达到检测或鉴定这些大分子物质的过程。Southern于1975年首先建立从琼脂糖凝胶电泳中分离的DNA转至纤维膜上，再与特定的带有放射性同位素标记的DNA（或RNA）片断杂交，最后经过放射自显影等方法从X光底片上显现一条或多杂交分子区带，从而达到检测特定DNA片断的方法，后来把这种方法称Southern Blotting（Southern印迹）；随后于1977年，Alwine等八以上类似方法用于检测经琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳中分离的特定RNA，此方法又称为Northern Blotting（Northern印迹）；1979年Towbin等再将该方法扩展到特定的蛋白质检测或分析上，成为Western Blotting（Western 印迹）

PCR：（聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR）PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点，应带有标记的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DAN或 RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸。(RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的 mRNA或DAN 的存在与定位；用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。 此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

二、袁隆平的杂交水稻研究过程,体现了辩证唯物论和认识论的哪些观点

辩证唯物主义: 1 辩证唯物论认为 物质决定意识 意识对物质具有能动作用 袁隆平有为祖国作贡献的高尚情操 树立了研究杂交水稻的正确意识 对物质即当前我国社会面临的粮食供应紧张问题的解决有着重要的推动作用 并且促进了我国水稻种植业的发展 有利于社会发展更加平稳 2 规律是客观的 袁隆平研究杂交水稻的做法是基于当前我国粮食短缺国情的反映 坚持了社会合理发展的客观规律与实际 坚持了一切从实际出发 实事求是的观点 研究工作从实际出发 以提高粮食产量为根本目标 有利于我国水稻种植业的全面发展 认识论: 1 实践是认识的来源 袁隆平对于杂交水稻的正确认识来源于长期的农田实践探索 2 实践是认识发展的动力 袁隆平加强在农田中的实地考察有利于促进水稻品种改革的认识的不断深化 继而得出更加科学的种植认识 3 实践是检验认识真理性的唯一标准 只有通过实地调研实践才能检验在水稻种植过程中出现的新事物的正确与否 体现了袁隆平科学种植杂交水稻的正确性 4 实践是认识的目的和归宿 袁隆平的杂交水稻方法的提出是为了更好地指导杂交水稻的种植 促进农村社会乃至全社会的不断进步 5 真理的条件性和具体性体现了袁隆平的粮食生产理论适用范围是有限的 须在实际种植时 不断深化创新 促进发展 体现了袁隆平的水稻种植理论的科学性与正确性 6 认识具有反复性 无限性和上升性 随着全国种植水稻技术的提高 水稻种植改革会进行得更加彻底与顺利 这从侧面体现了袁隆平以人为本的思想 体现了杂交水稻种植理论的正确性

三、1. 为检测三对基因间的连锁关系，进行以下杂交试验： AaBbCc×aabbcc

aabbCc AaBbcc是亲型配子产生，亲型配子类型为：abC和ABc，AabbCc aaBbcc是双交换配子产生，双交换配子类型是AbC和aBc，根据亲型配子和双交换配子知道，三个基因的顺序为B-A-C。

双交换率=0.04

AB的重组率=0.12+0.12-0.04=0.20

AC的重组率=0.06+0.06-0.04=0.08

这样BCA之间的顺序和距离就确定了，按照这个距离画出来就是连锁图。

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